细胞培养基如何选择？

ningxueqin528

　　1. 液体培养基贮存于4 oC 冰箱，避免光照，实验进行前放在37 oC 水槽中温热。

　　2. 液体培养基(加血清) 存放期为六个月，期间glutamine 可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。

　　3. 粉末培养基配制(以1 升为例)：

　　3.1. [url=http:///www.pall.cn/zh_cn/biotech/cell-culture.html]细胞培养基过滤[/url]通常须添加10 % 血清，因此粉末培养基之配制体积为900 ml，pH 为 7.2 - 7.4。NaHCO3 为另外添加，若将NaHCO3 粉末直接加入液体培养基中会造成 pH 之误差，或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3 粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2 气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH 易发生改变。

　　3.2. 材料：

　　3.2.1. 纯水(milli-Q 水或二次至三次蒸馏水，水品质非常重要)

　　3.2.2. 粉末培养基

　　3.2.3. NaHCO3 (Sigma S-4019)

　　3.2.4. 电磁搅拌器

　　3.2.5. 无菌血清瓶

　　3.2.6. 0.1 或0.2 mm无菌过滤膜

　　3.2.7. pH meter

　　3.2.8. 真空帮浦

　　3.2.9. CO2 气体

　　3.3. 步骤：

　　3.3.1. 取粉末培养基溶于700 ml milli-Q 水中，搅拌使其溶解。

　　3.3.2. 称取适量之NaHCO3 粉末(数量依培养基种类而异，表一)溶于200ml milli-Q 水中，搅拌使其溶解，然后通入CO2 气体至饱和，约3-5 分钟。

　　3.3.3. 将溶解且含饱和CO2 之NaHCO3 溶液加入溶解之液体培养基中混合。混后溶液之pH 应为7.2-7.4，除非pH 值偏差太大，否则不需用酸碱再调整之。

　　若为太碱，可再通入CO2 气体调整pH。培养基以真空帮浦通过过滤膜时，pH 会升高0.1-0.2。

　　3.3.4. 以0.1 或0.2 mm 无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮存于4 oC。(血清亦可加入培养基中一起过滤)