最新：细胞培养验室规划设计基本要求

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验室规划设计是必须以“用、安全”为出发点，综合考虑各种仪器设备安全操作要求，配置相应验设备。



1、验室设计

细胞培养是一种菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证微生物污染和不受其它有害因素的影响细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和烟尘细胞培养室的设计原则一般是菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消在另一室



2、常用设施及设备

(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式,直流式和外流式大类

(2)菌操作间:一般由更衣间,缓冲间和操作间部分组成操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等缓冲间可放置电冰箱,冷藏器及消好的菌物品等

()操作间:普通培养箱,离心机,水浴锅,定时钟,普通天平及日常分析处理物

(4)洗刷消间:烤箱,消锅,蒸馏水处理器及酸缸等

(5)分析间:显微镜,计算机及打印机等





、培养器皿

常用细胞培养器皿有培养瓶,培养板,培养皿等常准备量是使用量的倍器皿应选择透明度好,,利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品常用的器皿有下面几种

(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培养液,血清等液体,常用规格有500,250, 100等几种

(2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200,100,50,25,10等几种

()培养皿:用于开放式培养及其它用途分直径0,60,120等几种

(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体常用1和10两种短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种

(5)离心管:离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用

于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类前者分别为50,0,15;后者则多为10和5

(6)其它:如角烧瓶,烧杯,量筒,漏斗,注器等



4、细胞培养温度

维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度不同种类的细胞对培养温度要求也不同人体细胞培养的标准温度为65℃±05℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过9℃时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在9-40℃1小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;在40-41℃1小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;41-42℃1小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能;当温度在4℃以上1小时,细胞全部死亡相反,温度不低于0℃时,对细胞代谢虽有影响,但并伤害作用;把细胞放入25-5℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢;放在4℃数小时后,再回到7℃培养,细胞仍能继续生长细胞代谢随温度降低而减慢当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而死亡但是,如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油),可在深低温下如-80℃ 或-196℃(液氮)长期保存

5、合适的气体环境

气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳氧气参与羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的H值大多数细胞的适宜H为72-74,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长,如成纤维细胞最适合H是74-76每种细胞都有其最适H值。